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實(shí)驗(yàn)干貨：ELISA洗板操作要點(diǎn)
準(zhǔn)確儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA結(jié)果準(zhǔn)確關(guān)鍵，怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實(shí)驗(yàn)中一般有5次加樣，即加標(biāo)本、加檢測(cè)抗體、加酶結(jié)合物和加顯色底物及終止液。下面BUNSEN本生小編詳解如下：
1、實(shí)驗(yàn)室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會(huì)導(dǎo)致最后讀數(shù)差別，因此避免儀器帶來(lái)誤差。
2、加樣前，溶液充分混勻，垂直懸空加入液體，避免加在孔壁上，不可產(chǎn)生氣泡。
3、加樣時(shí)避免液體濺出，如有樣本濺出，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄。
4、如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應(yīng)記錄實(shí)驗(yàn)。
5、每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個(gè)孔顯色時(shí)間相同。
ELISA實(shí)驗(yàn)通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質(zhì)。因此，不嚴(yán)格的洗滌容易出現(xiàn)交叉污染或洗不干凈背景高。 洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)操作最多一個(gè)步驟，如何洗板呢?
1、BUNSEN本生ELISA 洗液需要20倍稀釋?zhuān)渲脮r(shí)用新鮮無(wú)污染的蒸餾水或去離子水現(xiàn)配現(xiàn)用。洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。
2、垂直倒液，迅速、干脆，重復(fù)2-3次，不要手腕左右搖擺、旋轉(zhuǎn)來(lái)倒液體。
3、倒液后將酶標(biāo)板放在吸水紙拍干。用干凈的濾紙，不要用衛(wèi)生紙，因?yàn)榧?xì)小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導(dǎo)致洗板不干凈，結(jié)果偏高或偏低，重復(fù)孔的數(shù)值也會(huì)相差很大。
4、每孔加300uL洗液，太多將溢出孔外污染相鄰的孔。特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度孔流串到低濃度孔或空白孔，其造成的交叉污染將無(wú)法洗掉，背景增高。
5、加入洗液浸泡30s。洗板時(shí)間太短，洗滌效果不佳。延長(zhǎng)洗板時(shí)間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。
6、每次拍板不要重復(fù)在一個(gè)地方拍，特別是洗去酶的步驟;拍板不宜過(guò)輕，否則拍不干凈，拍板不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下，最后一次一定要扣干凈。
7、不管用多道加樣器、洗瓶、吸管，還是洗板機(jī)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作不要減少洗滌體積、洗滌時(shí)間和次數(shù)。
8、扣干后的酶標(biāo)板立即加液，不能干板太久。
注：以上資料僅供參考，具體產(chǎn)品信息請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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